對植物病害的診斷技術(shù)
植物病害免疫學(xué)診斷技術(shù)是伴隨著醫(yī)學(xué)免疫學(xué)及動物醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的不斷發(fā)展而發(fā)展起來的, 它是以抗原與抗體的特異性反應(yīng)為基礎(chǔ)而發(fā)展起來的一種技術(shù), 不僅迅速、可靠, 而且應(yīng)用方便。早在 1918 年, 該技術(shù)就已經(jīng)應(yīng)用于植物病原細(xì)菌的檢測, 至今, 已經(jīng)發(fā)展成為一門成熟的技術(shù)。非標(biāo)記免疫分析又稱傳統(tǒng)免疫分析, 它是利用抗原-抗體反應(yīng)后理化性質(zhì)的變化對抗原抗體進(jìn)行測定的方法。根據(jù)手段不同, 又可分為凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、免疫電泳等。標(biāo)記技術(shù)克服了非標(biāo)記技術(shù)靈敏度不高, 缺乏可供測量的信號等缺點(diǎn)。利用放射性、熒光或酶等物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體, 再利用抗原抗體反應(yīng)的特異性, 使得靈敏度大大提高, 同時檢測的方法和類型也有了更多的變化, 主要有熒光標(biāo)記免疫分析、放射性標(biāo)記免疫分析、發(fā)光免疫分析、免疫酶分析、免疫膠體金快速診斷技術(shù)。
它不僅具有免疫熒光法和放射免疫法的反應(yīng)靈敏、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn), 而且克服了常規(guī)血清學(xué)方法受病原菌濃度、粒體形態(tài)和抗血清用量等限制的缺點(diǎn), 是目前免疫測定中最常用的技術(shù)之一。目前, 植物病菌檢測儀己被廣泛用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和農(nóng)業(yè)等許多領(lǐng)域, 可成功的對病毒、真菌、細(xì)菌、線蟲等抗原及抗體檢測, 從而對病害作出診斷。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時, 過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合, 而不再形成夾心復(fù)合物, 所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。種方法所測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可, 因此, 對小分子抗原的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)是快, 因?yàn)橹挥幸粋�保溫洗滌過程。但需用較多量的酶標(biāo)記抗原為其缺點(diǎn)。
當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去, 或不易得到足夠的純化抗原時, 可用此法檢測特異性抗體。如抗原為高純度的, 可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì), 直接包被不易成功, 可采用捕獲包被法, 即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體, 然后加入抗原, 形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì), 然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭結(jié)合反應(yīng)。間接法是檢測抗體最常用的方法。本法只要更換不同的固相抗原, 可以用一種酶標(biāo)抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。但不如雙抗體夾心法靈敏性高。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果, 但應(yīng)盡可能予以純化, 以提高試驗(yàn)的特異性。
目前, 免疫分析發(fā)展?fàn)顩r是多種方法并存, 相互競爭, 相互補(bǔ)充。非放射免疫分析相對放射免疫分析更具有綜合優(yōu)勢和潛力, 發(fā)展速度更快。不管怎樣, 目前還沒有一種免疫分析技術(shù)是完美無缺的, 各種技術(shù)還需要不斷發(fā)展和完善, 并且人們還在不斷研究, 以開發(fā)出更新更理想的免疫分析技術(shù)。在進(jìn)行病害診斷操作中, 診斷者要根據(jù)標(biāo)本情況和實(shí)驗(yàn)條件, 靈活選擇其中一種或兩種方法, 進(jìn)行準(zhǔn)確無誤的診斷。診斷的準(zhǔn)確性既依賴診斷方法是否準(zhǔn)確, 以及設(shè)備條件和標(biāo)本處理情況; 又依賴診斷者的經(jīng)驗(yàn)、技能等。中國糧油儀器網(wǎng) http://m.feta-virtual.com/
